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病毒載體系列丨腺相關病毒(AAV)載體

 

腺相關病毒AAV有表達滴度高、宿主免疫反應輕微、感染譜廣、安全性高等優(yōu)勢,成為近年來在基因治療領域應用廣泛的病毒載體之一。西美杰代理Cell Biolabs AAV Helper Free Expression System)的AAV三質(zhì)粒表達系統(tǒng)是目前常用的一類AAV載體系統(tǒng)

https://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/VPK-402%20Fig%201_0.jpg

圖所示,該套AAV系統(tǒng)包含表達載體(Expression vector)、包裝質(zhì)粒Rep-Cap plasmid)和輔助質(zhì)粒pHelper plasmid)。其中表達載體是AAV病毒的核心,包含了ITR序列、CMV啟動子、多克隆位點等,用于攜帶外源基因;包裝質(zhì)粒負責表達AAV病毒的結(jié)構蛋白,決定AAV的血清型和組織嗜性。由于野生型AAV是復制缺陷型的,必須依賴輔助病毒(如腺病毒)才可以感染靶細胞。AAV Helper Free Expression System利用在不同質(zhì)粒上提供這些必要的輔助基因來確保重組AAV病毒具有感染性,消除AAV對輔助病毒的依賴,解決了AAV生產(chǎn)過程中要去除腺病毒污染難題



?      Expression vector包含ITR序列,多克隆位點,攜帶目的基因;

?      Rep-Cap plasmid包含RepCap基因,決定了重組AAV的血清型和組織嗜性;

?      pHelper plasmid 包含腺病毒的VA、E2AE4基因,使重組AAV具有感染性。

  1. AAV表達載體

AAV基因組為4.7kb,能夠攜帶的外源基因上限在4kb左右。Cell Biolabs提供了8AAV的表達載體,兼容常用的各種AAV包裝系統(tǒng),表達載體都攜帶有2ITR序列,使AAV基因組能正確形成T-形二級結(jié)構,進而保證了病毒的有效復制和包裝。載體上有氨芐抗性基因、多克隆位點,還可以根據(jù)實驗需要選擇帶標簽、無標簽、不含啟動子或自身互補型self-complementaryAAV表達載體(產(chǎn)品詳情如下表)

貨號

質(zhì)粒名稱

載體容量(kb

特征

VPK-415

pAAV-IRES-Puro

1.8

Puro標簽

VPK-416

pAAV-IRES-Neo

1.6

Neo標簽

VPK-417

pAAV-IRES-Hygro

1.4

Hygro標簽

VPK-418

pAAV-IRES-GFP

1.7

GFP標簽

VPK-419

pAAV-IRES-Bsd

2

BSD標簽

VPK-410

pAAV-MCS

3

無標簽

VPK-411

pAAV-MCS Promoterless

4

啟動子

VPK-430

pscAAV-MCS

1.5

self-complementary

 

 

  1. AAV包裝質(zhì)粒

AAV共有12個血清型,其中AAV1-6是從人類組織中分離獲得,并且具有明確的的抗體反應性,是目前常用的經(jīng)典AAV載體。盡管不同血清型AAV都具有正二十面體結(jié)構,但其衣殼蛋白在序列與空間構象上的多樣性,使得AAV與不同細胞表面受體親和力及組織嗜性存在顯著差異。在感染嗜性方面,AAV-2的感染譜較廣應用,AAV-1在骨骼肌中的轉(zhuǎn)導效率較高,AAV-3易于轉(zhuǎn)導巨核細胞,AAV-5AAV-6感染呼吸道上皮細胞的優(yōu)勢較為顯著。因此,根據(jù)AAV不同血清型在組織感染性的相對特異性,可以用于在針對不同靶向組織的基因治療中尋求最佳的AAV載體類型與組合。除了常見的六個血清型AAV之外,Cell Biolabs還提供兩種重組型AAV包裝質(zhì)粒AAV-DJAAV-DJ-8,如下圖所示,這兩種AAVRep-Cap基因是由多個野生型AAV的結(jié)構基因重組而來,與其他野生型相比,AAV-DJ在體外細胞轉(zhuǎn)導效率更高,AAV-DJ-8則更適用于體內(nèi)感染實驗。

常用的AAV-2為參照,下表比較不同血清型AAV對種屬、組織細胞的感染率。值得一提的是,AAV-DJ對不同物種的肝細胞、黑色素瘤細胞以及胚胎干細胞的感染能力都有絕對優(yōu)勢,甚至高于常用的AAV-2。

輔助質(zhì)粒pHelper plasmid是確保重組AAV具有感染性的重要質(zhì)粒,pHelper載體中包含了腺病毒的E2A、E4基因VA RNA,由于我們常用的AAV包裝細胞系293293T含有E1基因,因此該系統(tǒng)中的pHelper質(zhì)粒上沒有再提供E1基因。

AAV包裝質(zhì)粒貨號Rep-Cap&pHelper plasmids

VPK-401

VPK-402

VPK-403

VPK-404

VPK-405

VPK-406

VPK-400-DJ

VPK-400-DJ-8

細胞系

組織類型

AAV-1

AAV-2

AAV-3

AAV-4

AAV-5

AAV-6

AAV-DJ

AAV-DJ/8

Huh-7

人肝臟

13

100

2.5

0.0

0.1

10

500

0.2

HEK293

人腎臟

25

100

2.5

0.1

0.1

5

500

0.3

HeLa

人子宮

3

100

2.0

0.1

6.7

1

667

0.2

HepG2

人肝臟

3

100

16.7

0.3

1.7

5

1250

0.5

Hep1A

小鼠肝臟

20

100

0.2

1.0

0.1

1

400

0.1

911

人視網(wǎng)膜

17

100

11

0.2

0.1

17

500

0.0

CHO

倉鼠卵巢

100

100

14

1.4

333

50

25000

5.0

COS

非洲綠猴腎臟

33

100

33

3.3

5.0

14

500

0.3

MeWo

人皮膚

10

100

20

0.3

6.7

10

2857

1.0

NIH3T3

小鼠成纖維

10

100

2.9

2.9

0.3

10

500

0.1

A549

人肺臟

14

100

20

ND

0.5

10

1000

0.1

HT1180

人成纖維

20

100

10

0.1

0.3

33

333

0.2

Monocytes

人原代單核細胞

1111

100

ND

ND

125

1429

100

ND

Immature DC

人樹突細胞

2500

100

ND

ND

222

2857

200

ND

Mature DC

人樹突細胞

2222

100

ND

ND

333

3333

100

ND

ND = Not Determined


 

西美杰代理的Cell Biolabs品牌除了提供AAV病毒的全套載體系統(tǒng)外,還有腺病毒(Adenovirus),慢病毒(Lentivirus)和逆轉(zhuǎn)錄病毒(Retrovirus)載體系統(tǒng),為廣大科研用戶提供了高效、便捷的病毒載體產(chǎn)品庫,小編之后還會一一為大家介紹這些病毒載體,敬請期待!

北京西美杰科技有限公司作為Cell Biolabs中國區(qū)代理,始終秉承著專業(yè)、嚴謹?shù)膽B(tài)度為廣大生物科技領域科研與企業(yè)客戶提供高品質(zhì)產(chǎn)品與優(yōu)質(zhì)服務,如果您對上述產(chǎn)品感興趣,歡迎隨時撥打全國客服熱400-050-4006或登錄西美杰官方網(wǎng)站www.fushunwax.com.cn查詢訂購!

 

 

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